ELISA測定的常用模式--間接法測抗體

　　基本方法的操作如下:

　　1.將病原體的抗原在碳酸鹽緩沖液中4~C過夜包被，形成固相抗原，洗滌去除未與固相結(jié)合或結(jié)合不緊的抗原后，用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉，洗滌去除未結(jié)合的部分及雜質(zhì)。

　　2.加入含待測抗體的臨床樣本如血清等，溫育一定時間后洗板;此時，待測抗體就會與固陽上特異抗原反應(yīng)而吸附于固相上。

　　3.加入酶標記的抗人IgG抗體，溫育一定時間后洗板;此時，在固相上即形成固相抗原—待測抗體—酶標二抗復合物。

　　4.加入酶底物，溫育顯色測定(圖2—6)。

　　間接法測抗體在目應(yīng)用zui多的是丙型肝炎病毒抗體(抗HCV)、人免疫缺陷病毒抗體(抗HIV)以及梅毒螺旋體抗體等的測定。從上述的測定模式可見，間接法測抗體，嚴格地講，所測定的僅為抗體的IgG類，不涉及IgM和IgA類，這是由酶標二抗體所決定的。

　　影響間接法測定抗體的一個較大的因素是包被抗原的純度。現(xiàn)在間接法測抗體中所使用的抗原一般均為基因工程重組抗原，如HCV的NS3，NS4，NS5，HIV的gp41和gpl20和梅毒螺旋體TpNl5，TpNl7，TpN47等?；蚬こ炭乖诩兓瘯r應(yīng)盡量去除用來表達的宿主如大腸桿菌的抗原，以免由于機體存在對這種宿主抗原的抗體而引起假陽性反應(yīng)。此外，由于機體的IgG類抗體濃度較高，其中絕大部分為機體接觸外界環(huán)境刺激所產(chǎn)生的非特異IgG，因此，為避免這些高濃度非特異IgG對固相的吸附所致的假陽性反應(yīng)，通常需對待測樣本做一定程度的稀釋。

　　本生通用耗材：深孔板、96孔硅膠墊、吸頭、封板膜、玻片、試管、量杯、試劑槽、離心管、移液器等。

　　本生細胞培養(yǎng)類：血清瓶系列、細胞培養(yǎng)玻片、細胞鏟/刮/過濾器、移液管、細胞培養(yǎng)皿/板/瓶、培養(yǎng)小室。

　　核酸提取耗材：移液器吸頭系列、深孔板及磁套系列、PCR管/PCR板系列、提取管。

　　試劑包裝類：廣口試劑瓶、窄口試劑瓶、保存管、試劑盒、血清、蛋白、抗體/抗原等。

　　病毒采樣：一次性病毒取樣器/采樣器、唾液采集器等。