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小鼠ELISA試劑盒操作步驟及實驗提醒

更新時間:2024-03-21    點擊次數(shù):2013

  小鼠ELISA試劑盒操作步驟及實驗提醒

 

  小鼠ELISA試劑盒操作步驟:

  1. 標準品的加樣:設(shè)置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;。

  2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

  3. 加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外。

  4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。

  5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

  6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。

  7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

  8. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

  9. 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

  實驗提醒:

  1、混合蛋白溶液時,避免起泡。

  2、加校準品與樣本時,每個校準品濃度和樣本都要更換移液槍頭,公共組分應(yīng)該懸臂加樣,避免交叉污染。

  3、合適的溫育時間,和充分的洗滌步驟,是保證實驗結(jié)果準確性的必要條件。

  4、底物溶液為無色液體,保存過程中變?yōu)樗{色,代表底物溶液已經(jīng)失效,不得使用。

  5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致,加入終止液后,藍色底物產(chǎn)物,會瞬間變?yōu)辄S色。

  6、實驗中,用剩的板條,應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

  7、所有液體組分,使用前充分搖勻,嚴格按照說明書標明的時間、加樣量及加樣順序進行溫育操作。

  8、檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定,嚴格防止交叉污染,所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進行處置。

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